外泌体是由活细胞排泄的直径约为30-150 nm的小囊泡,具备典型的脂质双份子层布局;存在于细胞造就上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水和其它生物体液中;外泌体携带有多种卵白质、脂类、RNA等主要信息,不仅在细胞与细胞间的物资以及信息通报中起主要作用,更有望成为多种疾病的初期诊断标记物。图1:外泌体的排泄和外泌体的构成外泌体研究线路
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图2:翌圣外泌体提取试剂盒分散历程三年夜质查验证,切合鉴定 金尺度
图3:翌圣外泌体试剂盒提取外泌体质检要领翌圣外泌体鉴定试剂盒翌圣生物针对于外泌体标记卵白CD63以及TSG101检测而研发的一款高效且利便实用的外泌体鉴定试剂盒产物合用于人、年夜鼠、小鼠外泌体的鉴定。试验成果:
注:P为CD63 TSG101阳性比照品,S为外泌体样品外泌体运用一、外泌体在肝癌成长、诊断以及医治中的作用首都医科年夜学从属北京佑安病院李伟华等人在Molecular Cancer杂志揭晓的有关外泌体研究的综述:别离先容了一、外泌体在慢性乙型肝炎至肝细胞癌历程中的作用 二、外泌体与肝细胞癌的瓜葛 三、外泌体在肝癌诊断以及预后中的运用 四、外泌体在肝癌医治中的运用,对于相干触及的最新研究内容举行总结以展现外泌体在肝癌的发生,成长,诊断以及医治中的主要性,为研究职员进一步阐明外泌体在肝癌中的作用机制,并促成外泌体在临床诊断中的运用以及肝癌的医治提供参考。
图4:外泌体在CHB转化为HCC历程中的作用机制引自:Li X, Li C, Zhang L, Wu M, Cao K, Jiang F, Chen D, Li N, Li W. The significance of exosomes in the development and treatment of hepatocellular carcinoma. MolCancer. 2020 Jan 4;19(1):1.二、外泌体介导的miR-567在乳腺癌曲妥珠单抗中的要害作用2020年1月22日,郑州年夜学第一从属病院韩明利等人在Cell death disease杂志揭晓的文章提供来自乳腺癌以及生物信息学阐发的可公然得到的表达谱数据被用于筛选曲妥珠单抗耐药的潜在miRNA举行增益或者缺掉功效测定。成果注解,与应对患者比拟,曲妥珠单抗耐药患者的miR-567光鲜明显降低;与亲代细胞比拟,曲妥珠单抗耐药细胞中的miR-567也下调。miR-567的过表达逆转了化学耐药性,而miR-567的缄默沉静在体外以及体内都可引诱曲妥珠单抗。展现了miR-567在按捺自噬以及增长对于曲妥珠单抗的化学敏感性中的基本作用,注解它多是乳腺癌患者的有但愿的医治靶点以及预后指标。
图5:外泌体介导的miR-567转移曲妥珠单抗可逆转耐药性引自:Han M, Hu J, Lu P, et al. Exosome-transmitted miR-567 reverses trastuzumab resistance by inhibiting ATG5 in breast cancer.Cell Death Dis. 2020;11(1):43. Published 2020 Jan 22.外泌体标志检测1、亲脂性染料:PKH-67/PKH-26染料可以不变的与细胞膜脂质区联合并发出荧光,重要用于细胞体外标志、体外细胞增殖研究和体表里的细胞掉踪研究。
图6:PKH67标志外泌体被巨噬细胞接收引自:Wang Z, Maruyama K, Sakisaka Y, et al. Cyclic Stretch Force Induces Periodontal Ligament Cells to Secrete Exosomes That Suppress IL-1 Production Through the Inhibition of the NF- B Signaling Pathway in Macrophages.Front I妹妹unol. 2019;10:1310. Published 2019 Jun 20.2、亲脂性羰花青染料:DiI/DiD/DiO/DiRDiI, DiO, DiD, DiR是一系列亲脂性的荧光染料,可以用来染细胞膜以及其它脂溶性生物布局。
图7:DiD标志的外泌体与PC12细胞孵育3H后共聚焦不雅察的成果引自:Tian T, Zhu YL, Zhou YY, Exosome uptake through clathrin-mediated endocytosis and macropinocytosis and mediating miR-21 delivery. J Biol Chem. 2014 Aug 8;289(32):22258-67
图8:成果所示体内静脉打针DiR标志的外泌体,24H落伍行成像效果引自:Wiklander OP, Nordin JZ, O'Loughlin A, et al. Extracellular vesicle in vivo biodistribution is determined by cell source, route of administration and targeting.J Extracell Vesicles. 2015 Apr 20;4:26316.3、渗入型的化合物标志法:CFSE/CFDA/Calcein-AM一、CFSE:羧基荧光素二醋酸盐虎魄酰亚胺酯,常称为 CFSE,可被动散布进入细胞。 这类试剂没有颜色以及荧光,直至细胞内的酯酶去除了其醋酸盐基团,孕育发生能发出敞亮荧光的羧基荧光素虎魄酰亚胺酯。 虎魄酰亚胺酯与细胞内氨基反映,形成不变且能用醛固定剂固定的荧光偶联物。
图9:SKOV3细胞对于SKOV3外泌体的摄入历程引自:Escrevente, Cristina et al. Interaction and uptake of exosomes by ovarian cancer cells. BMC cancervol. 11 108. 27 Mar. 2011,二、Calcein-AM:Calcein-AM被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗入性的极性份子Calcein,从而被滞留在细胞内并发出荧光被检测到。
图10:在无血小板血浆中,用Calcein-AM,钙黄绿素紫,di-8-ANEPPS,乳黏附素以及CD61-APC染色流式阐发图引自:de Rond L, Libregts SFWM, Rikkert LG, et al. Refractive index to evaluate staining specificity of extracellular vesicles by flow cytometry.J Extracell Vesicles. 2019;8(1):1643671. Published 2019 Jul 25.产物订购